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產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、血小板 / 內(nèi)皮細(xì)胞膜提取物中的 P 選擇素（P-Selectin/CD62P）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于血小板活化、內(nèi)皮細(xì)胞激活、血栓形成及炎癥反應(yīng)研究等領(lǐng)域。

產(chǎn)品名稱：大鼠P選擇素elisa試劑盒

英文名稱：P-Selectin/CD62P ELISA Kit

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

產(chǎn)品貨號(hào)：CS-6166E

檢測原理：

大鼠 P 選擇素 (P-Selectin/CD62P) ELISA 試劑盒的原理是雙抗體夾心法，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行識(shí)別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 P-Selectin 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，P-Selectin 被固相抗體捕獲。

檢測：加入生物su化的抗大鼠 P-Selectin 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

實(shí)驗(yàn)步驟?：

?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。

?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。

?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。

?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。

?洗滌?：同步驟3。

?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。

?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。

?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作步驟?：

1.加樣孵育

每孔精準(zhǔn)加入 100μL 對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測樣本，空白孔加等量；貼封板膜密封微孔板，置于 37℃恒溫孵育箱，避光孵育 90min，保證抗原抗體充分結(jié)合。

2.洗板

輕柔棄去孔內(nèi)液體，吸水紙上快速拍干；每孔加滿洗滌工作液，靜置浸泡 30s，甩干拍凈；重復(fù)洗滌5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)，降低背景值。

3.加酶結(jié)合物孵育

除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 標(biāo)記特異性檢測抗體；輕微水平晃板混勻，重新封板，37℃避光恒溫孵育 60min。

4.二次洗板

重復(fù)上述洗板操作 5 次，嚴(yán)格拍干孔內(nèi)殘留液體，杜絕殘留洗液造成假陽性、數(shù)據(jù)偏差。

5.底物顯色

避光條件下，每孔加入 90μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻；37℃避光精準(zhǔn)孵育 10~15min，此時(shí)液體逐步顯現(xiàn)藍(lán)色，顯色深淺與待測物含量正相關(guān)。

6.反應(yīng)終止

嚴(yán)格遵循加樣順序，每孔快速加入 50μL 酸性終止液，輕晃微孔板充分混勻，藍(lán)色即刻轉(zhuǎn)為黃色，終止酶促顯色反應(yīng)。

7.上機(jī)讀數(shù)檢測

加終止液后15min 內(nèi)，用酶標(biāo)儀測定各孔 450nm 波長吸光度（OD 值）；以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD 值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合方程計(jì)算待測樣本目標(biāo)蛋白濃度。