鮑皰疹樣病毒PCR檢測試劑盒檢測原理
【中文名稱】：鮑皰疹樣病毒PCR檢測試劑盒
【英文名稱】：Abalone Herpeslike Virus(AbHV)PCR
【產(chǎn)品規(guī)格】：96T/48T。
【保存條件】：2-8℃低溫保存
【保質(zhì)期】：6個月，所有試劑盒均提供批次。
檢測原理
試劑盒針對鮑皰疹樣病毒的保守基因序列設(shè)計特異性引物（熒光定量款搭配專屬熒光探針），通過PCR擴增反應(yīng)特異性放大病毒核酸片段。普通PCR款擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，在551bp目標(biāo)片段位置出現(xiàn)特異性條帶即可判定為陽性；熒光定量款可通過實時監(jiān)測擴增過程中的熒光信號，結(jié)合梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)曲線實現(xiàn)病毒載量絕對定量。
探針法熒光定量PCR款操作流程
?陽性對照梯度稀釋?：在獨立的污染防控區(qū)域，用模板稀釋液將1×10?拷貝/μL的陽性對照做10倍梯度稀釋，得到102~10?拷貝/μL共6個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
?反應(yīng)體系配制（20μL體系）?：
每個反應(yīng)管加入10μL 2×qPCR MagicMix、2μL引物探針混合液、6μL無酶水、2μL核酸模板
同步設(shè)置PCR陰性對照（無酶水為模板）、PCR陽性對照（10?拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品為模板）
?qPCR擴增程序?：95℃預(yù)變性3min；95℃ 10s → 60℃ 30s，共40個循環(huán)，在60℃階段采集熒光信號。
結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)
普通PCR：目標(biāo)樣本電泳條帶位置與陽性對照一致，且所有對照結(jié)果正常，判定為鮑皰疹樣病毒陽性；無對應(yīng)條帶判定為陰性。
熒光定量PCR：Ct值≤35且擴增曲線呈典型S型，陰性對照無擴增，判定為陽性；Ct值＞38或無擴增曲線判定為陰性；Ct值35~38之間需重復(fù)復(fù)檢確認(rèn)。
關(guān)鍵注意事項
所有試劑全程-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，融化后需渦旋混勻并瞬時離心，所有操作在冰上進行。
嚴(yán)格分區(qū)操作：試劑配制區(qū)、樣本提取區(qū)、擴增檢測區(qū)物理隔離，全程使用帶濾芯無核酸酶槍頭，防止氣溶膠交叉污染。
陽性對照必須在獨立區(qū)域操作，嚴(yán)禁將高濃度陽性對照帶入試劑配制區(qū)和樣本處理區(qū)，避免污染整批試劑。
廢棄反應(yīng)管、槍頭等耗材需經(jīng)121℃高壓滅菌30分鐘后再丟棄，擴增產(chǎn)物按實驗室生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批號的試劑盒組分禁止混用，封板膜僅限一次性使用，避免交叉污染。
本試劑盒僅用于水產(chǎn)科研與鮑魚疫病監(jiān)測，不可用于動物臨床診斷或人體相關(guān)檢測，可特異性檢測鮑魚組織、養(yǎng)殖水體等樣本中的鮑皰疹樣病毒（AbHV）核酸，引物經(jīng)過優(yōu)化無交叉反應(yīng)，覆蓋普通PCR款與探針法熒光定量PCR款兩種規(guī)格。
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