豹源性成分探針法PCR熒光定量試劑盒如何正確使用
點擊次數：130 更新時間：2026-08-18
豹源性成分探針法PCR熒光定量試劑盒僅用于科研場景，以下是完整的正確使用操作流程：
一、實驗前準備
?環境與耗材?：提前劃分試劑準備區、樣本處理區、擴增區三個獨立區域，準備帶濾芯無酶吸頭、無菌離心管，實驗前對各區域紫外消毒30分鐘。
?試劑預處理?：試劑盒內所有組分自然融化，充分混勻后短暫離心，反應液全程避光放置，避免反復凍融超過7次。
二、標準曲線梯度稀釋
標記6個離心管，每管加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液。
從1×10?拷貝/μL的陽性對照開始，依次10倍梯度稀釋，震蕩1分鐘后冰上暫存，得到6個梯度的標準曲線樣品。
三、樣本DNA制備
用兼容的核酸純化方法提取待測樣本DNA，若有N個待測樣本，同步設置N+2個提取體系，分別為待測樣本、1個樣本制備陽性對照、1個樣本制備陰性對照。
提取完成后檢測DNA純度，OD260/280控制在1.8左右，避免核酸降解。
四、qPCR反應體系設置
定量分析時標記N+9個PCR管，定性分析僅需選1個標準曲線梯度即可。
按20μL體系依次加入反應組分，先加待測樣本與陰性對照，最后加陽性對照模板，短暫離心排除管內氣泡，蓋緊管蓋。
五、擴增與結果判讀
按儀器適配的參數設置擴增程序，完成熒光信號采集。
定量檢測以陽性對照濃度log值為橫軸、Ct值為縱軸繪制標準曲線，推算待測樣本濃度；定性檢測時，陰性對照Ct≥40、陽性對照Ct≤36為有效實驗，待測樣本Ct≥40為陰性，<36為陽性，36-40區間需重復驗證。
六、實驗收尾
用10%次氯酸或75%酒精擦拭工作臺與移液器，所有實驗耗材按生物危害廢物規范處理。
再次對操作區進行紫外消毒，避免殘留核酸污染后續實驗。
